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利用Split GFP 來篩選表達

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當碰到某個沒有做過或者沒有可參考文獻的蛋白的時候,這時就會有非常多的表達條件需要來篩選去找到最優的表達條件(詳情請看質粒設計和表達篩選部分)。傳統的表達檢測辦法是在破菌后跑電泳或者做蛋白質印跡,但這些方法太麻煩而且樣品量一大時間就會太過冗長。為了加快篩選的速度和效率,佰翱得已經在我們日常使用的三種表達體系中(大腸桿菌,昆蟲細胞和哺乳動物細胞)建立了Split GFP11蛋白的表達和重組的篩選體系 (S.Cabantous et. al. Nature Biotechnology 2004) 。重組蛋白通過一段連接序列將GFP11片段(大約15個氨基酸)連在N端或者C端,當這個GFP11片段與GFP另外的部分(GFP1-10,大約200個氨基酸,既可以共表達也可以在后期直接加入)結合后,就會產生熒光。因此,熒光值的高低水平也能夠作為檢測折疊正確的可溶性重組蛋白表達量的一個參數。雖然這個體系有時會有假陰性出現,但是能夠非常快速的篩選數量可觀的表達條件這一優勢,使得這種方法還是非常值得一試。

 

佰翱得利用Split GFP11 蛋白篩選表達條件:

 

為了檢測蛋白的表達量,我們將大腸桿菌菌液破碎(已經過誘導表達)的上清與包含有GFP1-10片段的檢測溶液混合,熒光值(Ex480nm, Em510nm)會隨著時間的推移升高。至于昆蟲細胞和哺乳動物細胞中的表達檢測(轉染之后),在去除培養基之后就直接往細胞中加入檢測溶液(包含了一種能夠融膜的去垢劑)。

 

Wuxi Biortus Biosciences Co. Ltd.

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